Sperm Viability in Ram Semen Diluted and Stored in Three Different Extenders

Abstract

Semen was collected with an artificial vagina from 4 one-year-old rams, in order to study the changes in sperm motility and membrane integrity of spermatozoa split-diluted and stored at 5 °C during 7 days in sodium citrate, Tris, and milk-based extenders, respectively. Sperm motility was assessed subjectively and sperm membrane integrity was determined using the fluorescent probes Calcein-AM and Ethidium homodimer. Representative samples were studied using scanning electron microscopy (SEM). The average incidence of sperm motility decreased over time in all the extenders (p<.001). The incidence of spermatozoa showing progressive motility and intact plasma membrane was significantly higher in semen diluted with sodium citrate than in the other 2 extenders following 4 days of dilution until the end of the study. Evaluation with SEM confirmed the findings obtained with the supra vital fluorescent dyes. The results of the present study indicated that there were no differences between sodium citrate-, Tris- or milk-based extenders when ovine liquid semen was stored at 5 °C during a short period (2 days). However, when semen was stored for longer time, spermatozoa in the sodium citrate-based extender sustained its viability better.

Sammanfattning

Sperma samlades med hjälp av artificiell vagina från fyra stycken ett år gamla baggar i syfte att studera förändringar i spermiemotilitet och membranintegritet  hos spermier spädda med (split-sample teknik) natriumcitrat-, Tris- respektive mjölkbaserad spädningsvätska och förvarade vid 5 °C under sammanlagt sju dagar. Spermiemotiliteten bedömdes subjektivt under faskontrast-mikroskop och spermiemembranintegriteten bestämdes med hjälp av de fluorescerande markörerna Calcein-AM och Ethidium homodimer.

Representativa prover studerades i svepelektronmikroskop (SEM). I medeltal sjönk den procentuella spermiemotiliteten i alla spädningsvätskorna med tiden (p<0.001). Frekvensen spermier som uppvisade progressiv motilitet och intakta plasmamembraner var signifikant högre i sperma spädd i natriumcitrat läsning jämfört med de två andra spädningsvätskorna efter 4 dagars färvaring och fram till försökets slut. Utvärdering i SEM verifierade de fynd som gjorts med hjälp av de fluoroscerande markörerna. Resultaten från denna studie indikerar att det inte farins någon skillnad melian forvaring i natriumcitrat-, Tris- eller mjölkbaserad spädningsvätska när baggsperma förvarades vid 5 °C under en kortare period (2 dagar). När sperma forvarades under längre tid bibehöll emellertid spermier spädda i natriumcitrat lösning sin livsduglighet bättre.